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高壓制備色譜準(zhǔn)備工作要做哪些

更新時(shí)間:2015-07-23      點(diǎn)擊次數(shù):2252
   制備色譜簡單來說,就是在化學(xué)化工醫(yī)藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜。本文介紹下高壓制備色譜的目的以及需要做哪些準(zhǔn)備工作。

  高壓制備色譜的目的:

  制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來說,高壓制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。

  高壓制備色譜需要做的部分準(zhǔn)備工作:

  1.樣品的前處理:高壓制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

  2.固定相的選擇:硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對(duì)硅膠進(jìn)行的硝酸銀(或緩沖液)處理。

  3.裝柱方法的選擇:根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大,顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度。一般來說,顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。

  濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當(dāng)柱直徑大于20mm,所加壓力為30-40bar時(shí),高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,可采用柱長壓縮技術(shù)。這種方法,先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。

  壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設(shè)備,在柱子填完后,應(yīng)用有柱效的測(cè)量,對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。

  4.流動(dòng)相的選擇:除了和分析色譜同樣的考慮外,在選用流動(dòng)相時(shí),要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說,不宜采用高毒性溶劑,對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,溶劑的純度也要考慮在其中。

  5.加樣的方法:一般的進(jìn)樣方法有用注射器進(jìn)樣,用旋轉(zhuǎn)閥進(jìn)樣,通過六通閥進(jìn)樣,通過主泵進(jìn)樣,通過輔泵進(jìn)樣,固體上樣。

  6.泵的選用:根據(jù)有無脈沖、能承受的zui大壓力、控制的精度、售后服務(wù)等來選擇泵。

  7.檢測(cè)器的選用:一般的分析池的zui大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專門的制備池的zui大允許流速可為150mL/min。有時(shí),采用旁路分離管,將少量流體導(dǎo)入分析池進(jìn)行檢測(cè),是一個(gè)不錯(cuò)的辦法,但其濃度的誤差會(huì)相對(duì)較大。

  其他還有產(chǎn)品收集,分離以及柱轉(zhuǎn)換等等就不再一一詳述了,如果您有興趣了解更多高壓制備色譜的信息,上海宸喬生物科技有限公司。

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